Как правильно приготовить микропрепарат?

Страница 1 из 1

Как правильно приготовить микропрепарат?

#1   Iri-na

  • Прохожий
  • Pip
  • Группа: Ветеринар
  • Сообщений: 3
  • Регистрация: 30 Сентябрь 09
  • Имя:Ирина
  • Отчество:Владимировна
  • Должность:Наёмный врач
  • ГородКиев

Отправлено 01 Октябрь 2009 - 18:44

Уважаемые коллеги, кто знает методику изготовления постоянных (неживых) микропрепаратов, поделитесь пожалуйста (или методикой, или ссылочкой ). Конкретно интересует длительное сохранение эктопаразитов.
Каким клеем нужно пользоваться, чтобы не разъело экспонат?
Что делать, если паразит толстенький, и при сдавливании между двумя стеклами он лопается?

#2   Parasitology

  • Паразитолог
  • Группа: Отец - основатель
  • Сообщений: 518
  • Регистрация: 06 Сентябрь 09
  • Имя:Сергей
  • Отчество:Владимирович
  • Должность:Научный сотрудник
  • ГородНовосибирск

Отправлено 01 Октябрь 2009 - 19:14

Золотым стандартом изготовления постоянных препаратов является "монтирование" эктопаразитов в среду (жидкость) Фора-Берлизе.

Фора-Берлезе:
дистиллированная вода - 50 мл;
гуммиарабик сухой - 30 г;
хлоралгидрат - 200 г;
глицерин - 20 мл.

Способ приготовления:
- в плотно закрывающуюся колбу емкостью 500 мл наливают дистиллированную воду, всыпают гуммиарабик и помещают ее в термостат (температура 40- 56 -С) до полного растворения гуммиарабика (не менее 1 суток);
- добавляют хлоралгидрат и глицерин и снова держат в термостате до полного растворения хлоралгидрата (1 - 2 суток);
- для удаления посторонних примесей полученную жидкость фильтруют в термостате в стеклянной воронке через фильтр из стеклянной ваты (я использую синтетические ткани, мельничный газ, нейлон. Важно чтобы с ткани не сыпались фрагменты волокон!);
- готовую смесь хранят в темном месте, желательно в темной посуде.

Для употребления небольшую порцию отливают в маленький, плотно закрывающийся пузырек, удобно использовать корковую пробку с вставленной в нее стеклянной глазной палочкой. Я обычно отливаю в «пенициллинку» и использую препаровальную иглу или иглу от шприца прикреплённую к ручке.

Работать с жидкостью Фора следует очень аккуратно, т.к. она содержит сильный окислитель - хлоралгидрат (работать только в халате, не капать на одежду, не допускать попадания на руки и слизистые оболочки, тщательно вымыть руки после работы). Фора съедает ткани, включая ткани самих насекомых, зато хитиновые покровы становятся чётко просматриваемыми, виден каждый волосок и щетинка. Также Фора съедает и ткани хозяев, просветляя препарат.

Для приготовления препарата на середину предметного стекла стеклянной палочкой наносят 1-2 капли жидкости Фора и переносят туда клещей прямо из пробы, воды или из спирта. Под бинокулярным располагают непосредственно на стекле, утопив их в капле, часть - брюшной, часть - спинной стороной вверх. После этого каплю накрывают покровным стеклом, плавно опуская его так, чтобы в препарат не попали пузырьки воздуха, а клещи не сдвинулись к краю покровного стекла.

Препараты с жидкостью Фора просветляют в термостате при температуре 54-56 С в течение 2-3 суток. При необходимости последующего длительного хранения препаратов их желательно выдерживать в термостате не менее 3 - 4 недель.

Я так не делаю никогда! Если надо растворить быстрее и просветлить, оставляю на 15 минут на открытом воздухе. Закрываю стеклом и просто оставляю на горизонтальной поверхности, чтобы стекло не съезжало и жидкость не вытекала. Препараты проявляются сами, постепенно день за днём. Сами высыхают. Если жидкость при высыхании вытекла и часть преперата «запустела» необходимо аккуратно добавить жидкость, просто капнув у края стекла и наклонив препарат в нужную сторону.

Если образовался крупный пузырь, то ни в коем случае не отдирать стекло! Пузырь убрать очень просто. Берёте корневую (стоматологическую) иглу, которые должны быть всегда под рукой для изготовления препаратов. Ей делаете туннель от края стекла до пузыря. Такой же ход в среде Берлизе делаете с другой стороны. Капаете у края одного из ходов жидкость Берлизе и наклоняете препарат. Жидкость втекает в ход благодаря тому, что воздух может свободно выходить через другое отверстие.

Хранят препараты в горизонтальном положении на картонных или фанерных планшетах.

Если насекомое толстое, тогда можно капнуть на него Фору. Оставить примерно на сутки, добавить ещё каплю и лишь после этого накрыть насекомое покровным стеклом с «ножками». Если таких стекол нет, то их можно сделать с помощью парафина или мыла. Углом стекла покровного царапаете кусок парафина и на углу вырастают «ножки» из парафина. Пустот под стеклом не избежать, поэтому придётся доливать Фору регулярно.

После полного высыхания препаратов необходимо полностью «обвести» края, чтобы не было пустот. Лучший способ сохранить препарат, это сделать акантовку с помощью лака для ногтей, прозрачного. Он не пропускает воздух и не даёт препарату высыхать полностью. Если же препарат пересох и закристаллизовался, то препарат можно размочить в обычной воде и залить заново.

#3   Parasitology

  • Паразитолог
  • Группа: Отец - основатель
  • Сообщений: 518
  • Регистрация: 06 Сентябрь 09
  • Имя:Сергей
  • Отчество:Владимирович
  • Должность:Научный сотрудник
  • ГородНовосибирск

Отправлено 01 Октябрь 2009 - 19:16

Второй метод, который используется для гистопрепаратов, для сохранения всех видов паразитов это монтировка в канадский бальзам.

Канадский бальзам

В отличие от Форы, в канадский бальзам переносить насекомых и клещей можно только освободив их от спирта и после обезвоживания. В противном случае бальзам может помутнеть. Для этого насекомых проводят через серию спиртов 70, 96 и абсолютный. Абсолютный спирт необязателен, но желателен. Для получения абсолютного спирта используют безводный медный купорос (он белый) и 96% спирт. После того, как медный купорос посинеет, спирт переливают в новый сосуд с белым, сухим купоросом. В результате вся вода связывается, и спирт становится абсолютным. Такой спирт хранят плотно закрытым. Если медный купорос посинел, значит, пора его заменить. После обезвоживания, препарат необходимо избавить от спирта. Для этого насекомое переносят в гвоздичное масло (продаётся в аптеке). Масло необходимо держать закрытым, оно обладает раздражающим и аллергенным действием. После масла монтируют в бальзам, также как и в Фору. Важно помнить, что бальзам сохнет очень долго! Зато такие препараты хранятся более 100 лет! Если необходимо извлечь, «размонтировать» препарат, то для этого используют о-ксилол.


О приобретении. Канадский бальзам продаётся в медицинских фирмах, и химреактивах. Гуммиарабик это пищевая смола, приобрести можно по знакомству в кондитерских или спец фирмах (фасовки очень большие), либо в химреактивах (виде порошка). Гвоздичное масло – в любой аптеке. Хлоралгидрат – только старые запасы. О-ксилол – в магазинах химрективов. Медный купорос – в любом магазине хозтоваров или для дачников, в химреактивах.

#4   Parasitology

  • Паразитолог
  • Группа: Отец - основатель
  • Сообщений: 518
  • Регистрация: 06 Сентябрь 09
  • Имя:Сергей
  • Отчество:Владимирович
  • Должность:Научный сотрудник
  • ГородНовосибирск

Отправлено 01 Октябрь 2009 - 19:56

Почти полный набор оборудования который используется повседневно для изготовления препаратов эктопаразитов:

1. Стереоскопический микроскоп
2. Гвоздичное масло
3. Игла от шприца с самодельной ручкой из стержня для гелевой ручки, для набора Форы.
4. Аликвота Форы-Берлизе для использования.
5. Полный объём среды Берлизе.
6. Предметные стёкла.
7. Корневая игла вставленная в основу автоматического карандаша.
8. Препаровальная игла.
9. Спирт.

Прикрепленные изображения


#5   Parasitology

  • Паразитолог
  • Группа: Отец - основатель
  • Сообщений: 518
  • Регистрация: 06 Сентябрь 09
  • Имя:Сергей
  • Отчество:Владимирович
  • Должность:Научный сотрудник
  • ГородНовосибирск

Отправлено 01 Октябрь 2009 - 19:59

Картонный и деревянный планшеты для сушки препаратов.

Прикрепленные изображения


#6   Parasitology

  • Паразитолог
  • Группа: Отец - основатель
  • Сообщений: 518
  • Регистрация: 06 Сентябрь 09
  • Имя:Сергей
  • Отчество:Владимирович
  • Должность:Научный сотрудник
  • ГородНовосибирск

Отправлено 01 Октябрь 2009 - 20:07

Погребального цвета коробочка сделанная под заказ для горизонтального хранения препаратов.

Прикрепленные изображения


#7   Iri-na

  • Прохожий
  • Pip
  • Группа: Ветеринар
  • Сообщений: 3
  • Регистрация: 30 Сентябрь 09
  • Имя:Ирина
  • Отчество:Владимировна
  • Должность:Наёмный врач
  • ГородКиев

Отправлено 01 Октябрь 2009 - 20:55

Сергей Владимирович огромное спасибо! пока вроде все понятно. Приобрету реактивы, буду пробовать. А каким методом лучше сохранять пухопероедов и гамазоидных клещей? с канадским бальзамом или в среде Фора?

#8   Parasitology

  • Паразитолог
  • Группа: Отец - основатель
  • Сообщений: 518
  • Регистрация: 06 Сентябрь 09
  • Имя:Сергей
  • Отчество:Владимирович
  • Должность:Научный сотрудник
  • ГородНовосибирск

Отправлено 01 Октябрь 2009 - 21:16

Фора. Фора не подходит на мой взгляд только для власоедов, они становятся слишком прозрачными, что их сложно даже найти. По гамазоидами у меня есть отдельная монография, там ещё гляну и спрошу у специалистки по этим товарищам - работает в соседней лабе. Будут вопросы - обращайтесь. Подскажу ещё методики и тонкости ремесла. Если надо в фотографиях.

#9   Iri-na

  • Прохожий
  • Pip
  • Группа: Ветеринар
  • Сообщений: 3
  • Регистрация: 30 Сентябрь 09
  • Имя:Ирина
  • Отчество:Владимировна
  • Должность:Наёмный врач
  • ГородКиев

Отправлено 02 Октябрь 2009 - 19:46

Спасибо!
Страница 1 из 1