Кисты Семенников

В настоящее время для детекции и идентификации бруцелл и лабораторного подтверждения диагноза используются молекулярно-биологические методы исследования, в частности метод Полимеразной Цепной Реакции (ПЦР), позволяющий в короткие сроки (в течение рабочего дня) определить наличие специфической последовательности ДНК бруцелл в пробах как клинического, так и полевого материала.

ПЦР проявила себя как высокоспецифичный и чувствительный метод лабораторного диагноза в случае острого и хронического бруцеллеза у людей и бруцеллеза у крупного рогатого скота, превосходящий по чувствительности и специфичности бактериологический и традиционные серологические тесты.

В тест-системе для постановки ПЦР используют праймеры, синтезированные на основе последовательности гена BCSP31, кодирующего поверхностный белок наружной мембраны B.abortus размером 31 кД [ 2 ]. Последовательность этого гена является идентичной для всех видов бруцелл и поэтому, эти праймеры являются родо-, а не видоспецифичными. Родоспецифические праймеры: прямой праймер Br1 5`- AGT CAG ACG TTG CCT ATT G–3` и обратный праймер Br2 5`- GTG TTC AGC CTT GAT ATC G–3` фланкировали фрагмент ДНК размером 260 п.н. и обеспечивали высокую специфичность ПЦР.

После подтверждения специфичности реакции данные праймеры были использованы для определения чувствительности метода. С этой целью была осуществлена постановка ПЦР с лизатами, содержащими в различных концентрациях клетки бруцелл всех видов. Количество вносимых клеток определяли титрованием суспензий на твердой питательной среде. Применение праймеров Br1 и Br2 позволило выявить специфический фрагмент 260 н.п. во всех образцах лизатов, полученных из 10 клеток бруцелл.

Изучение чувствительности тест-системы при индикации бруцелл в объектах внешней среды и биологических объектах было проведено на пробах, искусственно контаминированных B.abortus 99 и B.suis 1330 в различных концентрациях. По мере уменьшения числа микробных тел в пробах снижался процент положительных результатов, однако оставался значительным даже при исследовании проб, содержащих десять клеток.

Практическое использование ПЦР с целью идентификации возбудителя бруцеллеза было проведено при изучении 10 штаммов неидентифицированных микроорганизмов, которые были выделены от больных собак и, предположительно, отнесены к роду Brucella. Культуры были выделены от собак, находящихся в питомниках и частном секторе. Использование ПЦР позволило в течение одного дня установить их принадлежность к бруцеллам, а изучение фенотипических свойств показало, что выделенные от собак культуры являются бруцеллами вида B. canis.